

小鼠表皮角質形成細胞提取物
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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。產品僅供科研使用
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
小鼠表皮角質形成細胞提取物【Mouse Skin: Normal Epidermal Keratinocytes Derivatives】
產品描述:小鼠表皮角質形成細胞提取物是從小鼠原代表皮角質形成細胞提取的,小鼠原代表皮角質形成細胞從正常小鼠皮膚組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin),離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
小鼠表皮角質形成細胞提取物 | Mouse Skin: | GOY-Y6720 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:產品僅供科研使用
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
以下是公司正在熱銷的產品:
環境離子(K)濃度化學比色法定量檢測試劑盒20 苦玄參苷X(標準品) Picfeltarraenin X 質量規格:HPLC≥97%,標準品
環境離子(Na)濃度化學比色法定量檢測試劑盒20 苦玄參苷X HPLC≥98% 20mg
環境鎂離子濃度化學比色法定量檢測試劑盒20 苦玄參苷IV(標準品) Picfeltarraenin IV 質量規格:HPLC≥98%,標準品
>98%,BR
大鼠乙酰輔酶A羧化酶合成酶(ACC)試劑盒 Rat Acetyl-CoA Carboxylase Syhetase,ACC ELISA Kit C10E6,10%溶液 C10E6 質量規格:BR
英文名稱HumanCCL1ELISAKit人CCL1規格:96T/48T C12E10,10%溶液 C12E10 質量規格:BR
秦皮亭;白蠟樹內酯
Fraxetin
分子式:C10H8O5
分子量: 208.17
CAS號:574-84-5
檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98%
規格:10mg 20mg50mg100mg500mg1g (可根據客戶需求包裝)
性狀: 本品為片狀結晶
作用與用途:本品用于含量測定。
提取來源:
本品為水犀科植物小葉白蠟樹(Fraxinus brngeana DC.)的樹皮。
藥理性質:
熔點228℃,在150℃變為黃色,熔點時變為棕色,為秦皮苷水解產物,溶于乙醇及鹽酸水溶液,微溶于沸水,難溶于乙。
用法:
色譜條件:流動相:-水-(31:69:0.5),檢測波長:254nm (僅供參考)
貯藏方法:
2-8°C,避光保存。
小鼠表皮角質形成細胞提取物小鼠髓樣前體細胞抑制因子2(MPIF2)ELISA試劑盒 ,英文名: MPIF2 ELISA Kit 石斛酚(標準品) dendrophenol 質量規格:鑒別
小鼠髓樣細胞觸發性受體2(EM2)ELISA試劑盒 ,英文名: EM2 ELISA Kit 洋艾素(標準品) ABSINTHIN 質量規格:供含量測定用
小鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)ELISA試劑盒 ,英文名: ucOC ELISA Kit α-常春藤皂苷(標準品) α-hederin 質量規格:供含量測定用
小鼠羧甲基賴酸(CML)ELISA試劑盒 ,英文名: CML ELISA Kit 款冬酮(標準品) Tussilago farfara, ext. 質量規格:供含量測定用
小鼠羧肽酶A3(CPA3)ELISA試劑盒 ,英文名: CPA3 ELISA Kit 耐斯糖(標準品) NISTOSE 質量規格:含量測定
小鼠羧肽酶N1(CPN1)ELISA試劑盒 ,英文名: CPN1 ELISA Kit 對羥基苯乙酮(標準品) 4'-Hydroxyacetophenone 質量規格:供含量測定用
小鼠鎖鏈素(Desmosine)ELISA試劑盒 ,英文名: Desmosine ELISA Kit 3,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇(標準品) 3,29-Dibenzoyl rarounitriol 質量規格:含量測定
小鼠胎盤鈣黏蛋白(CDHP)ELISA試劑盒 ,英文名: CDHP ELISA Kit 牛磺豬去氧膽酸(標準品) TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID SALT 質量規格:含量測定
小鼠胎盤泌乳素(PL)ELISA試劑盒 ,英文名: PL ELISA Kit 氫化大豆卵磷脂;氫化卵磷脂 HSPC;Lecithins Hydrogenated 質量規格:>95%,BR
小鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA檢測試劑盒Mouseplaceagrowthfactor,PLGF 96T/48T 鏈霉素(標準品) Streptomycin 質量規格:效價測定
注意事項:
1. 接收到小鼠表皮角質形成細胞提取物,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
