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小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物【Mouse Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes Derivatives】
產(chǎn)品描述：小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物是從小鼠原代胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取的，小鼠原代胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞從正常小鼠胚胎組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
活化部分凝血活酶時間(APTT)比色法檢測試劑盒20 苦杏堿醇 A HPLC≥98% 5mg

活化部分凝血活酶時間(APTT)凝固法檢測試劑盒20 苦味素 HPLC≥98% 20mg

活化蛋白C(APC)活性比色法定量檢測試劑盒20 苦蘇花皂苷C HPLC≥98% 5mg

活化蛋白C(APC)活性熒光定量檢測試劑盒20 苦蘇花皂苷C  Cussosaponin C  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

活化凝血因子11(FACTORXIa)活性比色法定量檢測試劑盒20 苦木西堿Q HPLC≥95% 20mg

七葉甙,七葉苷,七葉樹素

 Esculin

分子式：C15H16O9

分子量：340.28

CAS號： 531-75-9

檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98%

規(guī)格：20mg50mg100mg500mg1g (可根據(jù)客戶需求包裝)

性狀： 本品為白色結(jié)晶粉

作用與用途：本品用于含量測定。

提取來源：

本品為七葉樹科植物歐洲七葉樹Aesculushippocastanumlinn樹皮。

藥理性質(zhì)：

204℃-206℃（水合物）溶于熱酒精，，，和醋酸（水合物）。

用法：

色譜條件：流動相：-水（1:4) （調(diào)pH4)；檢測波長：348 nm(僅供參考)

貯藏方法：

 2-8°C，避光保存。
小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA試劑盒 ，英文名： GR-β ELISA Kit 拉寧（標(biāo)準(zhǔn)品）  Teicoplanin   質(zhì)量規(guī)格：效價測定

小鼠糖皮質(zhì)類受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 制霉菌素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Nystatin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定

小鼠糖皮質(zhì)類受體(GR)ELISA檢測試劑盒Mouseglucocoicoidreceptor,GR 96T/48T 肌苷5'-單  Inosine 5'-Monophosphate(IMP)  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠糖皮質(zhì)類受體(GR)ELISA試劑盒 ，英文名： GR ELISA Kit 苦玄參苷X（標(biāo)準(zhǔn)品）  Picfeltarraenin X  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒 ，英文名： CDT ELISA Kit 豆甾醇葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Stigmasterol glucoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠糖原0酸化酶B(PYGB)ELISA試劑盒 ，英文名： PYGB ELISA Kit 新霉胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Neamine   質(zhì)量規(guī)格：檢查

小鼠糖原0酸化酶L(PYGL)ELISA試劑盒 ，英文名： PYGL ELISA Kit 醌式利福平（標(biāo)準(zhǔn)品）  RIFAMPIN QUINONE   質(zhì)量規(guī)格：HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查

小鼠糖原0酸化酶M(PYGM)ELISA試劑盒 ，英文名： PYGM ELISA Kit 3-甲酰利福霉素SV（標(biāo)準(zhǔn)品）  Rifamycin  質(zhì)量規(guī)格：含量

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BB 96T/48T 7－氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（7-ADCA）（標(biāo)準(zhǔn)品）  7-ADCA  質(zhì)量規(guī)格：雜質(zhì)檢查

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 ，英文名： GP-BB ELISA Kit 哌拉西林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Piperacillin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測定
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。