

小鼠胎兒表皮角質形成層細胞
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凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
參數規格:
小鼠胎兒表皮角質形成層細胞【MouseEmbryo:NormalFetalEpidermalKeratinocytes】
產品描述:小鼠胎兒表皮角化細胞主要分布于表皮基底層,在上皮程序性死亡后,細胞產生角化并移向表皮。體外培養的表皮角化細胞容易導致終末分化,不能充分增殖。表皮覆蓋皮膚和粘膜表面,作為機體抵抗外界刺激的第一道防御性屏障,具有其他器官不可替代的重要生理功能。角質形成細胞可產生粘附分子和細胞因子,與天然免疫和體內穩態相關。公司提供的小鼠胎兒表皮角質形成層細胞,采用胰蛋白酶法制備而來。細胞的培養采用公司專利產品小鼠胎兒表皮角質形成層細胞培養試劑盒(MouseEmbryoPrimaCell:NormalFetalEpidermalKeratinocytesCatNo.3-4561)來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞(如脂肪細胞、纖維細胞等)的污染,同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下,小鼠胎兒表皮角質形成層細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
產品名稱 | 小鼠胎兒表皮角質形成層細胞 |
英文名稱 | MouseEmbryo:NormalFetalEpidermalKeratinocytes |
貨號 | GOY-Y6445 |
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)試劑盒 Human GDNF ELISA KIT 法羅培南(鈉)(2.5水) Faropenem 質量規格:度>99.0%,BR
人膠轉蛋白(TAGLN)試劑盒 Human TAGLN ELISA Kit 法卡林二醇 HPLC≥98% 10mg
人角化細胞因子(KAF)/雙調蛋白(AR)試劑盒 Human KAF/AR ELISA Kit 伐昔洛韋雜質F Valacyclovir Impurity F
人角化細胞生長因子(KGF)試劑盒 Human KGF ELISA Kit 伐倫克林氨基甲酰β-D-葡萄糖苷酸 Varenicline Carbamoyl β-D-Glucuronide
人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA檢測試劑盒HumanCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 96T/48T 伐地那非三水合鹽酸鹽(標準品) Vardenafil trihydrate 質量規格:HPLC>98%,標準品
小鼠降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒 ,英文名: PCT ELISA Kit N-乙酰-L-谷氨酰胺 N-Acetyl-L-Glutamine 質量規格:>98%,BR
大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISAKit 96T/48T N-乙酰-L-酪氨酸 N-Acetyl-L-Tyrosine 質量規格:0.98
人氧化酶試劑盒 Human Hypoxahine Oxidase ELISA Kit 甲基橙(生物染色) Methyl orange 質量規格:BS
RatsolubleIerleukin6receptor,sIL-6RELISAKit大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒規格:96T/48T 分散橙13 Disperse Orange 13 質量規格:90%,進口分包Bullatine A
分子式:C22H33NO2
分子量:343.51
CAS號:1354-84-3
檢測方式:高效液相色譜法HPLC≥98%
規格:20mg50mg100mg500mg1g (可根據客戶需求包裝)
性狀:本品無色結晶粉末
作用與用途:本品用于含量測定。
提取來源:
本品為毛茛科植物烏頭CommonMonkshoodMotherRoot的母根。
藥理性質:
熔點147~149℃。旋光度 +138°(苯)。不溶于水,溶于乙醇、有機溶劑和植物油。易溶于堿水,遇酸又沉淀析出。
用法:
色譜條件:流動相為一鹽緩沖溶液(pH7.3)(65:35);檢測波長:210nm (僅供參考)
貯藏方法:
2-8°C,避光保存、低溫下保存。
小鼠胎兒表皮角質形成層細胞CYTOCHROMEC蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25 二氫魚藤酮 HPLC≥98% 20mg
CYTOCHROMEC蛋白共沉淀分析試劑盒5 二氫醉椒素 HPLC≥98% 10mg
DAPI復染試劑盒50 二十八烷醇 GC≥98% 20mg
DAPKINASE蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25 二乙酰基大花旋覆花內酯 HPLC≥98% 10mg
DAPKINASE蛋白共沉淀分析試劑盒5 法卡林二醇 HPLC≥98% 10mg
DA高效液相色譜電化學定量檢測試劑盒20 番茄紅素 HPLC≥90% 20mg
DEAE噬菌體DNA化樹脂制備試劑盒1 番茄堿 HPLC≥98% 20mg
DeerSerumamyloidA,SAAELISA試劑盒鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 番瀉苷A HPLC≥98% 20mg
DEPC處理試劑盒100 番瀉苷B HPLC≥98% 20mg
DEPC水500毫升 番瀉苷C HPLC≥98% 10mg
收到小鼠胎兒表皮角質形成層細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
