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參數規格：

產品名稱：巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸

英文名稱：Nocardia brasiliensis

貨號: GOY-M4297

產品規格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據探針法 qPCR 原理開發了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f小鼠白介素-2(mouse IL-2)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  Carvedilol  72956-09-3  中文名：卡維地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Catalpalactone  1585-68-8  中文名：  分子式：C15H14O4 

小鼠白介素2(IL-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Baclofen  中文名：巴氯芬  分子式：C10H12ClNO2  度：98.0%

小鼠白介素-2   英文名稱：    ierleukin-2   規格：   48T/96T   英文縮寫：   IL-2  Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8  度：98.0%  關鍵詞：  強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

小鼠白介素1受體拮抗劑elisa試劑盒   小鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒、小鼠白介素1受體拮抗劑eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Cerebroside D  中文名：腦苷脂D  分子式：C43H81NO9  度：96.5%

17α-Neriifolin  7044-31-7  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.0%  關鍵詞：  海芒果; 強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

17α-Estradiol  57-91-0  中文名：17α-雌二醇  分子式：C18H24O2  度：99.0%  關鍵詞：    小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

17-Hydroxy-1a,2a-methylenepregna-4,6-diene-3,20-dione acetate  2701-50-0  中文名：  分子式：C24H30O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠CD30分子(CD30)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

17-Ethylendioxyandrosta-1,4-dien-3-one  2398-63-2  中文名：17-亞乙二氧基-雄-1,4-二烯-3-酮  分子式：C21H28O3  度：95.0%      小鼠骨成型蛋白elisa試劑盒   小鼠骨成型蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠骨成型蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠骨成型蛋白試劑盒、小鼠骨成型蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione  17183-98-1  中文名：醋酸環丙氯地孕酮  分子式：C24H30Cl2O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠骨保護素elisa試劑盒   小鼠骨保護素試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠骨保護素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠骨保護素試劑盒、小鼠骨保護素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。血小板膜糖蛋白 (GP IIb/IIIa)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  Pentoxyverine citrate  中文名：枸櫞酸噴托維林  分子式：C26H39NO10  度：98.0%

血小板活化因子受體   英文名稱：   Human Platelet Activating Factor Receptor   規格：   48T/96T   英文縮寫：   PAFR  Aspergillon A  中文名：  分子式：C22H32O  度：98.0%

血小板活化因子 (PAF)   作用：   ELISA   規格：   96T   原裝進口  Pentagalloylglucose  中文名：五沒食子酰葡萄糖  分子式：C41H32O26  度：98.0%

血小板活化因子   英文名稱：   platelet active factor   規格：   48T/96T   英文縮寫：   PAF  Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  1808159-02-5  中文名：  分子式：C56H84O20 

血糖含量試劑盒   酶標法    50管/48樣  4-(4-Aminophenyl)morpholin-3-one  438056-69-0  中文名：  分子式：C10H12N2O2

巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸N-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide  中文名：  分子式：C11H9NO3    豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Myricadenin A  中文名：  分子式：C39H40O17    豬白介素1α(IL-1α)ELISAkit   ELISA.   96T/48T           

Mumeose K  中文名：  分子式：C25H32O15    豬白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Monobenzone  中文名：莫諾苯宗  分子式：C13H12O2    豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Momor-cerebroside I  中文名：  分子式：C48H93NO10    豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

服務流程：

巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1、根據客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數據、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）