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RNATrip(總RNA提取試劑)

貨號：ZK-PL4158

品牌：子科生物ZIKER

描述：

RNAtrip成功避開各種商業RNA提取試劑盒的種種弊端，采用最新技術和工藝，在提取過程中既能有效裂解組織細胞，強烈抑制RNA酶活性，保護RNA免受降解，同時也能極為有效地分離去除DNA和蛋白質。RNAtrip使RNA分離如同提取質粒DNA一樣簡單可靠，可在30-60分鐘內完成，獲得極高純度的總RNA沉淀，可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保護、Poly(A) mRNA純化、體外翻譯等實驗。

儲存:

4℃密封避光保存兩年以上有效。因疏忽或冰箱意外停電，RNAtrip密封避光存放于25oC室溫數個月，品質不受影響。

適用:

(1) 固體組織 (100mg/ml ): 人、動物、植物的各種新鮮或凍存組織。

(2) 培養細胞 (5~10×106細胞/ml): 真核細胞，細菌、酵母。

(3) 液體標本(100μl/ml): 全血、體液、尿液，病毒樣品等。

用戶實驗用品和操作準備:

極微量的RNA酶都會導致RNA降解。分離RNA時，RNA酶污染主要來自以下五個方面：(1)來自實驗人員的雙手。(2)來自器皿、吸頭離心管、自備液體。(3)組織細胞破碎不可避免地釋放內源RNA酶。(4)RNA未能完全與蛋白質分離。(5)RNA沉淀和溶解時來自吸頭離心管和溶液。我們的Step by Step質量監測表明，RNAtrip可100％抑制RNA酶活性并在分離步驟完全清除RNA酶。因此在有RNAtrip存在的步驟中，使用高壓消毒20分鐘的吸頭離心管和溶液即可勝任RNA提取操作。然而在RNA溶解之后，來自實驗材料的RNA酶污染將會導致RNA降解，應嚴格使用高壓滅活RNA酶的用品。戴手套無疑是有益的，但戴口罩和帽子則無必要。只要嚴格按照本指南進行準備和操作，使用RNAtrip總是能獲得高純度RNA。

說明:

1. 每100mg組織RNA預期得率為：肝脾60-100mg, 腎50mg, 腦組織10-15mg, 胎盤20-40mg, 脂肪50mg。1x107個細胞通常得50-100 mg。1. 測定OD值，根據OD260計算RNA濃度。OD260/280比值可初步判斷RNA質量，比值在1.6-2.0之間均屬正常。起始組織量過大，或吸取了有機相或碎片，將使RNA樣品中蛋白和雜質含量高，RNA沉淀乙醇洗滌不充分(步驟7)，均可導致OD260/280比值降低。但切記OD260/280比值還受很多非質量因素的影響。例如，RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低，用TE或離子強度較高的溶液溶解時較高，但均不影響RNA后續使用。切記即便是已降解的RNA，OD260/280比值也能達到看似完美的2.0左右，因此該比值并非判斷RNA降解與否最佳的指標。判斷RNA質量的最佳途徑是進行普通RNA瓊脂糖電泳檢查RNA完整性。

2. 檢查RNA完整性。取1mg RNA樣品進行1%普通瓊脂糖凝膠電泳。溴化乙錠染色，紫外燈觀察。28S RNA~5kb亮度應該約為18S RNA~2kb的兩倍，有時可見0.1-0.3kb 的5SRNA。

3. 調整RNA溶液的體積或重沉淀RNA。

（1）加入適量DEPC處理過的高壓消毒純水或TE緩沖液，于RNA溶液中，使溶液體積補齊到約400ml；

（2）加入0.1體積的3M 醋酸鈉pH 5.2，混勻；

（3）加入2.5體積的純乙醇，混勻；

（4）冰上孵育10分鐘；

（5）執行上述RNA提取程序的步驟6－8。

4. RNAtrip勿直接接觸皮膚和吸入。如接觸皮膚，立即用大量水清洗。