

深圳子科生物科技有限公司
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支原-體-檢測試劑盒(PCR方法)
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支原體檢測試劑盒(PCR方法)
貨號:ZK-PL4008
品牌:子科生物/ZIKER
描述:
支原體污染已經成為細胞培養中高度重視的問題,因此定期進行支原體污染檢測十分必要。本試劑盒采用PCR方法,能特異性檢測各種培養細胞生物材料(如細胞培養物、實驗動物分泌物、動物血清等)中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物針對支原體 16s rRNA 序列保守區域設計,可直接使用細胞培養液作為 PCR 模板,特異性擴增支原體DNA,搭配配套的 Mix(2×)組分,一小時內即可完成,靈敏度高,可檢測低至20個拷貝的支原體。
效期:有效期12個月
儲存與運輸:冰袋(wet ice)運輸;-20℃保存
組成:
PCR Mix(2×) | 1 mL |
Primer Mix | 100 μL |
Positive Control | 50 μL |
Free Water | 1 mL |
1. 樣品準備:取適量待檢細胞培養上清于潔凈的PCR 管中,利用 PCR 儀 95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可用Free Water 稀釋后,取適量樣本于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理 5min 后作為模板;
2. PCR 體系配制:每次實驗需設置陰性對照(將 1μL待檢樣品換成等量的Free Water)與陽性對照(在1μL待檢樣品中加入0.5μL Positive Control 后一起作為Template),實驗時戴一次性口罩與手套,謹慎操作,防止操作不當引入外源支原體污染;
Component | Volume |
Template | 1 μL |
Primer Mix | 2 μL |
PCR Mix(2×) | 10 μL |
Free Water | To 20 μL |
3. PCR 程序設置:
Step | Temperature | Time | Cycles |
Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 20 s | 30 |
Annealing | 56℃ | 25 s | |
Extension | 72℃ | 10 s | |
Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
5. 結果分析:每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結果比較確認樣品支原體污染情況,陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結果中有條帶很有可能是PCR體系中出現污染,建議重新實驗確認結果。如有必要,也可對PCR產物進行常規測序,以確定具體的支原體種屬。
注意事項:
1. 本試劑盒可以檢測M.orale,M.arginini,M.bovis,M.fermentans,M.gallisepticum,M.hominis, M.pirum,Ureaplasmaspp,M.hyorhinis,M.pneumoniae,A.laidlawii等至少 11 種以上支原體污染。
2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻,使用完畢后于-20℃保存。
3. 每次實驗必須設置陰性對照、陽性對照,實驗組建議設置樣品模板梯度。
4. 操作時必須佩戴口罩,嚴格按照 PCR 操作標準,防止引入外源污染影響實驗結果。
5. 為了確保細胞實驗的可靠性及穩定性,建議定期進行支原體污染檢測。
6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


