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貨號(hào)：ZK-PL4002

品牌：子科生物ZIKER

過(guò)氧化氫酶檢測(cè)試劑盒（Catalase Assay Kit）是一種特異靈敏的檢測(cè)過(guò)氧化氫酶（Catalase）酶活力的試劑盒。Catalase 是一種廣泛存在于需氧細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶，通過(guò)催化過(guò)氧化氫（H2O2）分解為氧氣和水，降低生理和病理狀態(tài)下產(chǎn)生的活性氧對(duì)細(xì)胞的損傷。本試劑盒利用 Catalase 催化 H2O2 分解，然后利用過(guò)氧化物酶（Peroxidase）催化剩余 H2O2 與 OxiRed探針?lè)磻?yīng)生成可以通過(guò)比色法或熒光法檢測(cè)到的產(chǎn)物，從而定量分析 Catalase 酶活力。本試劑盒通過(guò)比色法（OD570nm）檢測(cè) Catalase 的線性范圍為 0.001-0.01U/ml，靈敏度≤0.001U/ml；通過(guò)熒光法（ex535nm-em587nm）檢測(cè) Catalase 的線性范圍為 0.0001-0.001U/ml，靈敏度≤0.0001U/ml。本試劑盒能夠檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解上清、組織裂解上清、血漿和血清中的 Catalase 酶活力。試劑盒組成

組份名稱

Lysis Buffer                        50 ml/瓶

Catalase Assay Buffer        25 ml/瓶

H2O2 Solution (0.88M)      0.5 ml/管

OxiRed Solution                60 μl/管

Peroxidase                         60 μl/管

Catalase                             60 μl/管

1. 超純水

2. 系列可調(diào)節(jié)量程移液器及吸頭

3. 離心管、透明（比色法）或黑色（熒光法）96 孔板

4. 多功能酶標(biāo)儀

-20℃儲(chǔ)存，有效期 12 個(gè)月。

1. 初次使用試劑盒時(shí)，小體積液體試劑請(qǐng)適當(dāng)離心后使用。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，除裂解液、檢測(cè)緩沖液和過(guò)氧化氫溶液外，其它試劑請(qǐng)置于冰上。

3. 嚴(yán)格控制反應(yīng)的溫度和反應(yīng)時(shí)間，樣品中酶活力過(guò)低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。

4. H2O2標(biāo)準(zhǔn)曲線和 Catalase 對(duì)照只需測(cè)定 1 次即可。

5. 本產(chǎn)品僅限專業(yè)人員用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

1. 樣品的準(zhǔn)備

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的細(xì)胞接種到培養(yǎng)板中，經(jīng)過(guò)干預(yù)因素處理后，直接吸取細(xì)胞上清，如果是懸浮細(xì)胞，4℃、300g 離心 5 分鐘，收集上清。

1.2 細(xì)胞裂解上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的細(xì)胞(1×106-1×107)收集到 2ml 的離心管中，4℃、300g 離心 5 分鐘，棄去上清，然后加入 200μl 的 Lysis Buffer，冰浴裂解 30min，4℃、10000g 離心 10 分鐘，收集上清。

1.3 組織裂解上清的準(zhǔn)備：將需要測(cè)定的組織(20-50mg)收集到玻璃勻漿器或自動(dòng)勻漿管中，然后加入0.5ml 的 Lysis Buffer，勻漿 1min，4℃、10000g 離心 10 分鐘，收集上清。

1.4 血漿樣品的準(zhǔn)備：取新鮮抗凝血液，4℃、1000g 離心 10 分鐘，上清為血漿。

1.5 血清樣品的準(zhǔn)備：取新鮮血液，室溫凝固 30min，4℃、1000g 離心 10 分鐘，上清為血清。

Catalase 檢測(cè)工作液的配制：根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)參考下表配制適量的 Catalase 檢測(cè)工作液，表中試劑按比例混合后即為 Catalase 檢測(cè)工作液。

                                    1 個(gè)樣品    10 個(gè)樣品      50 個(gè)樣品

Catalase Assay Buffer  49 μl         0.49 ml       2.45 ml

OxiRed Solution          0.5 μl         5 μl            25 μl

Peroxidase                  0.5 μl         20 μl            25 μl

比色法標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：在 1.5ml 離心管中，加入 870μl Catalase Assay Buffer，取 10μl 的 0.88M 濃度H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品加入離心管中配制 10mM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品；然后取另一 1.5ml 離心管，加入 980μl CatalaseAssay Buffer，取 20μl 的 10mM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品加入離心管中配制 200μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品；另外 6 根1.5ml 離心管，分別加入 500μl Catalase Assay Buffer，再吸取 500μl 的 200μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品依次倍倍稀釋為 100、50、25、12.5、6.25、3.12μM 濃度。熒光法標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：在 1.5ml 離心管中，加入 870μl Catalase Assay Buffer，取 10μl 的 0.88M 濃度H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品加入離心管中配制 10mM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品；然后取另一 1.5ml 離心管，加入 990μl CatalaseAssay Buffer，取 10μl 的 10mM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品加入離心管中配制 100μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品；再取另一1.5ml 離心管，加入 800μl Catalase Assay Buffer，取 200μl 的 100μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品加入離心管中配制20μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品；另外 6 根 1.5 ml 離心管，分別加入 500μl Catalase Assay Buffer，再吸取 500μl 的20μM 濃度 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品依次倍倍稀釋為 10、5、2.5、1.25、0.625、0.312μM 濃度。