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原位雜交技術可應用于什么方面

1.細胞特異性mRNA轉錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測。

４.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化，如染色體數量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細胞遺傳學的研究，如遺傳病的產前診斷和某些遺傳

多種探針標記檢測系統

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現的背景較低。

另一種多聚體促進劑是聚丙0烯0酸，用其鈉鹽，濃度為2%～4%。與硫酸葡聚糖相比，其優點是價格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化學試劑酚和Guandine thiocyanate也能促進雜交，它們可能是通過增加水的疏水性和降低雙鏈和單鏈DNA間的能量差異而發揮作用。酚作為雜交促進劑，只能在低DNA濃度的液相雜交中觀察到，該方法曾被稱為酚乳化復性技術，該法不能用于固相雜交，因酚可引起核酸與膜的非特異吸附作用，即使在液相雜交中的應用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通過降低雙鏈DNA的Tm值而起作用。此外，該分子還可以促進RNA的雜交，有裂解細胞而抑制RNase的作用。總之，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相雜交是目前zui常用的雜交促進劑。