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測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，中通常只含有NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測定原理：

MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）紫外分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 紫外分光光度法
規(guī)格 : 50管/48樣
貨號：GOY-01S6586
分類：三羧酸循環(huán)系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算百分率：
百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計(jì)算公式簡化為：
百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計(jì)算出來的百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒 ，英文名： TIEG1 ELISA Kit

大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA檢測試劑盒RatNeuron-specificenolase,NSEELISAKit 96T/48T

人G蛋白偶聯(lián)受體152(GPR152/PGR5)免疫試劑盒 Human GPR152 ELISA kit

英文名稱MouseAFPELISAKit小鼠甲胎蛋白(AFP)規(guī)格：96T/48T

冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒50次

RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISA試劑盒大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠脂肪甘油三酯酯酶(ATGL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai hepatitis B virus core aibody IgM (HBcAb-IgM) ELISA Kit 人抗乙型肝炎核心IgM抗體(HBcAb-IgM)ELISA試劑盒

Humanneuophilicalkalinephosphatase,NAPELISAKit 人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶(NAP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAACT(HumanAlpha1Aichymoypsin)ELISAKit人α1抗胰糜蛋白酶規(guī)格：48T/96T

胰蛋白酶抗原修復(fù)溶液50毫升

MouseNeuroophin3,-3ELISAKit小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
DHEA-S7 ELISA Kit 大鼠脫氫表雄酮S7Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti- Beta-Amyloid(25-35)/FITC 熒光素標(biāo)記β淀粉樣肽(25-35)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FOXN1 叉頭蛋白N1抗體 規(guī)格 0.2ml

ADRA1A(Mouse adrenergic alpha-1A receptor) ELISA Kit 小鼠能a1A受體 96T

NIPP1 英文名稱： 核蛋酸酶1抗體 0.2ml

ADAMTS15 英文名稱： 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶15型抗體 0.2ml

Anti- Beta-Amyloid(25-35)/FITC 熒光素標(biāo)記β淀粉樣肽(25-35)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）紫外分光光度法檢測試劑盒Anti-WIP1/FITC 熒光素標(biāo)記原癌基因WIP1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

抗ABC膜蛋白抗體 Anti-ABCG4 0.1ml

2 Cys Peroxiredoxin 英文名稱： 硫氧還蛋白還原酶抗體 0.1ml

EFTUD2 英文名稱： 延伸因子結(jié)合蛋白EFTUD2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FLT3 (Tyr589/591) 0酸化FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格 0.1ml

Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg