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液體樣本甘油酶法測定試劑盒    E1002

 

描述：甘油是甘油三酯的水解產物。脂蛋白酯酶能夠水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更加方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經典的GPO-Trinder酶學反應方法，通過比色測定液體樣本中的甘油含量。經過優化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在10-1200μmol/L，可靠性和重復性俱佳，適合生物醫學、食品實驗室檢測。

 

原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

 

適用范圍：測定血液、細胞培養基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

 

組成 ：（以250次為例）

(1)     R1試劑 40 ml

(2)     R2試劑 10 ml    

(3)     4 mmol/L甘油標準品1 ml

4 oC保存，6個月有效

 

所需設備：酶標儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計。最佳工作波長550nm，如無此波長建議優先選用570nm、次選530、490nm。

 

一 樣本處理：

1.        酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再進行測定。

2.        培養液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養基，如有細胞碎片應4oC,，12,000g離心5min,取上清進行測定。

3.        血液：對于新鮮抗凝血而言，可4oC，2,000g離心5min得到血漿；而對于非抗凝血來說，可先4oC靜置2h得到血清后，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內源脂肪酶，12,000g離心10min ,去上清進行測定或-20oC保存。

 

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合即可，立即使用或4oC保存<1天，變色棄去。

 

三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0濃度對照反應管。

 

四 甘油濃度測定：

1.        參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照100μl:100μl體積進行混合，然后再進行測定，但是如果樣品體積超過100μl時將會稀釋工作液中酶的濃度，致使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍的時候，可進行適當稀釋，然后根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。）

2.        37oC或25oC反應 15分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內穩定。

3.        先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管OD值。

4.        繪制標準曲線并計算甘油濃度。

附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。

 

 

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