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色譜儀是進行色譜分析的裝置,包括檢測裝置,記錄和數據處理分析,具有靈敏感,自動化程度高的特點,被廣泛應用在化學產品。以下是色譜儀的簡單的介紹。
色譜儀目前正朝微型、高通量、多功能等方向發展,盡管毛細管電泳市場份額并不大,但是由于毛細管電泳已廣泛應用于蛋白質組學、代謝組學以及中藥指紋圖譜等領域,因此其未來應用將為廣闊,市場規模將不斷擴大,也成為行業發展不能忽視的一點。
離子色譜儀器正逐漸向多個領域發展,尤其是向生命科學領域進軍,并取得重要應用。而微型化、毛細管離子色譜、聯用色譜由于能適應市場需求,發展尤為迅猛。在技術方面,微流控技術成為關注焦點,目前已經廣泛應用于毛細管電泳、PCR等多種儀器,隨著行業標準的不斷發展,未來發展將為快速和規范。
液相色譜法(HPLC)是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學反應轉變為有機化合物的無機物)的有效方法之一。 在已知的有機化合物中,約有80%能用液相色譜法分離、分析,而且由于此法條件溫和,不破壞樣品,因此特別適合高沸點、難氣化揮發、熱穩定性差的有機化合物和生命物質。
HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等,現代HPLC儀還有微機控制系統,進行自動化儀器控制和數據處理。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置。
目前常見的HPLC儀生產廠家國外有Waters 公司、Agilent 公司(原HP公司)、島津公司等,國內有上海伍豐科學儀器有限公司,上海禾工科學儀器有限公司,大連依利特公司、北京創新通恒、北京溫分等。
一、輸液泵
1.泵的構造和性能輸液泵是HPLC系統中重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個質量和分析結果的可靠性。輸液泵應具備如下性能:
①流量穩定,其RSD應小于0.5%,這關系到定性定量的準確性;
②流量范圍寬,分析型應在0.1~10ml/min范圍內連續調,制備型應能達到100ml/min;
③輸出壓力高,一般應能達到150~300KG/CM2:
④液缸容積小;
⑤密封性能好,耐腐蝕。
泵的種類很多,按輸液性質可分為恒壓泵和恒流泵。恒流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔往復泵。恒壓泵受柱陰影響,流量不穩定;螺旋泵缸體太大,這兩種泵己被淘汰目前應用多的是柱塞往復泵。
柱塞往復泵的液缸容積小,可至0.1ml,因此易于清洗和更換流動相,特別適合于再循環和梯度洗脫;改變電機轉速能方便地調節流量,流量不受柱壓影響;泵壓可達400KG/CM2.ADW主要缺點是輸出的脈沖性較大,現多彩采用雙泵系統來克服。雙泵按連接方式可分為并聯式和串聯式,一般說來并聯泵的流量重現性較好(RSD為0.1%左右,串聯泵為0.2~0.3%),但出現故障的機會較多(因多了單向閥),價格也較貴。
二、進樣器
一般分析常用六通進樣閥(以7725和7725I型最常見),其關鍵部件由圓形密封墊子(轉子)和固定底座(定子)組成。耐高壓(35~40MPA),進樣量準確,重復性好(0.5%),操作方便。六通閥進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。①用部分裝液法進樣時,進樣量應不大于定量環體積的50%(多75%),并要求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重復性決定于注器取樣的熟練程度,而且易產生由進樣引起的峰展寬。②用完全裝液法進樣時,進樣量應不小于定量環體積的5~10倍9少3倍,這樣才能完全置換定量環內和流動相,消除管壁效應,確保進樣的準確度及重復性。
