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柱式血清/血漿游離DNAout（cfDNA）

產品及特點 本產品是基于離心柱層析法，用于從血漿/血清中方便、快速、可靠地提取游離循環 DNA（circulating DNA、cell-free DNA，cfDNA）。本產品可用于從新鮮或冷凍血漿/血清樣品中分離各種大小的 cfDNA，它具有下列特點：

1. 操作簡單，整個過程只需要 20 分鐘左右。

2. 不需要額外在洗柱液中補加乙醇。

3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。

4. 與 PCR 和熒光 PCR 兼容。

5. 可在 30 μL~100 μL 范圍內靈活調節洗脫體積濃縮循環 DNA。

6. 適用于各種血清和血漿。 
規格及成分 成 份 編 號 大扁盒包裝
柱式血清/血漿游離 DNA 溶液 A 130979a 30 mL 上柱結合液 190602 40 mL 離心吸附柱（窄口） 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 3.0 170603 10 mL 使用手冊 130979sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸及保存，柱式血清/血漿游離 DNA 溶液 A 長期（1 月以上）放置時需要放 4℃。有效期一年。

自備試劑 無，但需要自備 RNase-free 的 1.5 mL 離心管（耗材）。

使用方法 1. 如果有 N 個樣品，標記 N+2 個 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 SarstedtCAT#:782.694.006)，多出的一個為陽性對照（PC），一個為陰性對照（NC）。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做個標記，以在后續操作時區別向心面和離心面。然后在離心管中分別加入 0.2 mL 血清或血漿，在PC 管中加入已經確認有陽性 DNA 的血清或血漿，在 NC 管中加入已經確認沒有陽性 DNA 的血清或血漿。

2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血漿游離 DNA 到各離心管中，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。注意：柱式血清/血漿游離 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能會產生結晶，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱結合液到離心管中，顛倒混勻后轉移一半的混合液（0.8mL）到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。

9. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。

10. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的 1.5 mL 離心管中，在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30uL DNA 洗脫液 3.0，然后室溫放置 2 分鐘。

11. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，離心管中的溶液即為游離 DNA 溶液。

12. DNA 樣品可以直接用于 PCR，也可放-20℃長期保存。