
弓形蟲檢測試劑盒-實時熒光PCR法
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產品名稱:弓形蟲檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
規 格: 50T
檢測方法: 實時熒光 PCR
保存方式: 2~8℃
有 效 期: 1年
產 地: 中國
用 途: 僅用于科研實驗
訂購流程:弓形蟲檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
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弓形蟲檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理
組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標本:取適量標本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準備區)
根據代檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1
管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:
試劑
WSSV 反應液
酶液
用量(樣本數為N)
20μl
1μl
3. 加樣(樣本處理區)
將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl,加入相應的
反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;
5. 結果分析判定
結果分析條件設定
設置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle,對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調整。
設置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規則的噪音線)的zui高點。
結果判斷
陽性:檢測樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數增長期;
可疑:檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復一次實驗,如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。

