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豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒詳細說明：

【產品名稱】

通用名稱：豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒

Name ：Toxoplasma gondii Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】48T/盒

豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒【預期用途】

弓形蟲病是由剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的人畜共患病，人及動物為該病的中間宿主，貓為其*宿主。該病廣泛分布于丐界各地，嚴重危害人和動物的健康，我國將其列為二類動物疫病。弓形蟲常引起動物収熱、、神經及極度虛弱，有點還表現、鼻有分泌物、口吏泡沫、収抖、搖頭、脫水和， 母畜収病則引起，給各地畜牧業造成了很大損失。目前還沒有理想的弓形蟲的藥物和疫苗，及時診斷并作出預防是控制該病的有效措施。實時熒光 PCR 技術由于高靈敏、高特異、及時檢測等特點，成為弓形蟲病檢測的収展趨勢[1-3]。

本試劑盒適用于檢測血液、腦脊液、肝、脾、腎、可疑食物等樣本中的弓形蟲， 用于弓形蟲感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采對弓形蟲基因組設計特異性的引物和探針，用熒光 PCR 技術對弓形蟲的核酸進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

注：

1） 不同批號試劑不能混用。

2） 試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。

豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

固體樣本：手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；液體樣本：直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；腦脊液直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；血液樣本：取抗凝血下層血細胞 50μL，加入 100μL 雙蒸水吹勻

1.2 DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000

rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管

3. 加樣（樣本處理區）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環參數設置：

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現明顯擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗結果出現 Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

7. 質控標準

陰性質控品：無明顯擴增曲線且無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

無菌注射器抽取血液 3~5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管；有的，動物戒取腦脊液進行檢測；疑似污染的食物取 1g 進行檢測

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒【參考文獻】

[1] 王頻佳, 張德純. 熒光定量 PCR 檢測弓形蟲基因方法的建立[J].臨床檢驗雜志, 2005, 23(2): 123-125.

[2] 彭武麗, 季新成, 叱茜, 等. 實時熒光定量 PCR 檢測弓形蟲 GRA6 基因方法的建立和應用[J]. 新疆農業科學, 2014.

[3] 國家質量監督檢驗檢疫總局. GB/T 18228.2-2008 實驗動物-弓形蟲檢測方法[S]. 北京：科學出版社, 2008.

產品圖片：

【生產企業】

企業名稱：上海烜雅生物科技有限公司

請直接向我司客服索取說明書

上海烜雅生物科技有限公司生產的豬弓形蟲 (TOX)熒光PCR檢測試劑盒質量高，價格低，售后有保證。為您的實驗保駕護航。

本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

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