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以下是細胞的訂購信息：

產品名稱：A7r5 大鼠胸大動脈平滑肌細胞

英文名稱：A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells

規格：5×105cells/瓶

產品貨號：BH-C3004

培養基：基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

注意事項：

實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作；每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面；

操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作；無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作；

小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級之無菌操作臺（至少ClassⅡ）。操作過程中，應避免引起aerosol之產生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。

操作流程：

1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：

1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。

1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。

1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。

1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。

1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 

1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線

Mad2L2 有絲分裂阻滯缺陷2樣蛋白2抗體

Monoamine Oxidase B 單胺氧化酶B抗體

MCM4 微小染色體維持缺陷蛋白4抗體

MAP1LC3A 自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體

MRF/C11orf9 髓鞘基因調控因子抗體

MYBPC1 肌球蛋白結合蛋白C抗體

Phospho-MKP1 (Ser318) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶1抗體

Metabotropic glutamate receptor 2 促代謝型谷氨酸受體2抗體

MGLUR3 代謝型谷氨酸受體-3抗體

CXCL2 巨噬細胞炎癥蛋白2（ GRＯβ）抗體

Metallothionein 金屬硫蛋白抗體

Phospho-MAP2(Ser136) 磷酸化微管相關蛋白2抗體

MMRN1 內皮細胞MMRN1蛋白抗體

Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)EPHB2重組人 EphB2 / Hek5 蛋白 (aa 570-987, His & GST 標簽) Protein VEGFA重組人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白 Protein NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD) Protein USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein C7重組人 C7 / Complement component 7 蛋白 (Fc 標簽) Protein RPS6KB1重組人 PS6K / RPS6KB1 蛋白 (GST 標簽) Protein CXCL5重組人 CXCL5 蛋白 Protein B3GNT2重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標簽) Protein 重組人 SLITRK6 蛋白 (His 標簽) Protein